Bộ phát hiện axit nucleic vi rút Corona (SARS-Cov-2) mới
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluquặngscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Psản phẩmt name 】Bộ phát hiện axit nucleic (SARS-Cov-2) mới (Phương pháp thăm dò RT-PCR huỳnh quang)
【Packaging specnếucations 】25 xét nghiệm/Bộ
【Intended ustuổi】
Bộ dụng cụ này được sử dụng để phát hiện định tính axit nucleic từ vi rút Corona mới trong gạc mũi họng, gạc hầu họng (họng), gạc mũi trước, gạc giữa cuốn mũi, rửa mũi và hút mũi từ những cá nhân bị nhà cung cấp dịch vụ chăm sóc sức khỏe của họ nghi ngờ mắc COVID19. Việc phát hiện gen ORF1ab và N của virus Corona mới có thể được sử dụng để chẩn đoán phụ trợ và theo dõi dịch tễ học đối với tình trạng nhiễm virus Corona mới.
【Principles of the proidure 】
Bộ công cụ này được thiết kế cho các đầu dò TaqMan cụ thể và các đoạn mồi cụ thể được thiết kế cho các chuỗi gen ORF1ab và N của vi-rút Corona mới (SARS-Cov-2). Dung dịch phản ứng PCR chứa 3 bộ mồi và đầu dò huỳnh quang cụ thể để phát hiện mục tiêu cụ thể, đồng thời một bộ mồi và đầu dò huỳnh quang cụ thể bổ sung được sử dụng làm chất kiểm soát tiêu chuẩn nội bộ của bộ phát hiện gen nội sinh.
Nguyên tắc thử nghiệm là đầu dò huỳnh quang cụ thể bị tiêu hóa và phân hủy bởi hoạt động exonuclease của enzyme Taq trong phản ứng PCR, do đó nhóm huỳnh quang phóng viên và nhóm huỳnh quang bị dập tắt được tách ra để hệ thống giám sát huỳnh quang có thể nhận được huỳnh quang tín hiệu, sau đó Thông qua hiệu ứng làm giàu của khuếch đại PCR, tín hiệu huỳnh quang của đầu dò đạt đến giá trị ngưỡng đã đặt-giá trị Ct (Ngưỡng chu kỳ). Trong trường hợp không có khuếch đại mục tiêu, nhóm báo cáo của đầu dò sẽ gần với nhóm dập tắt. Tại thời điểm này, quá trình truyền năng lượng cộng hưởng huỳnh quang xảy ra và huỳnh quang của nhóm phóng viên bị dập tắt bởi nhóm dập tắt, do đó thiết bị PCR huỳnh quang không thể phát hiện được tín hiệu huỳnh quang.
Để theo dõi việc sử dụng thuốc thử trong quá trình thử nghiệm, bộ sản phẩm được trang bị các đối chứng dương và âm: đối chứng dương chứa plasmid tái tổ hợp tại vị trí đích và đối chứng âm là Nước cất, được sử dụng để theo dõi ô nhiễm môi trường. Nên đặt đồng thời điều khiển dương và điều khiển âm khi thử nghiệm.
【Main components 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Thành phầnent | |
| Name | Thông số kỹ thuậtsự hóa hóa | số lượngtính chất | số lượngtính chất | |
| Kiểm soát tích cực | 180 µL/lọ | 1 | 1 | Plasmid nhân tạo, Nước cất |
| Kiểm soát tiêu cực | 180 µL/lọ | 1 | 1 | Nước cất |
| Hỗn hợp SARS-Cov-2 | 358,5 µL/lọ | 1 | / | Các cặp mồi đặc hiệu, đầu dò huỳnh quang phát hiện đặc hiệu, dNTP, MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Nước cất, v.v. |
| Hỗn hợp enzym | 16,5 µL/lọ | 1 | / | Enzym Taq, enzyme phiên mã ngược, enzyme UNG, v.v. |
| Hỗn hợp SARS-Cov-2 (đông khô) | 25 test/lọ | / | 1 | Các cặp mồi đặc hiệu, đầu dò huỳnh quang phát hiện đặc hiệu, dNTP, enzyme Taq, enzyme phiên mã ngược, nước cất, v.v. |
| Bộ đệm 2x | 375 µL/lọ | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Nước cất, v.v. |
Ghi chú：(1) Các thành phần trong các bộ lô khác nhau không thể trộn lẫn hoặc thay thế cho nhau.
(2) Chuẩn bị thuốc thử của riêng bạn: Bộ chiết axit nucleic.
【Storage condnóons Và expiration date 】
For BST-SARS-25:Vận chuyển và bảo quản ở -20±5oC trong thời gian dài.
For BST-SARS-DR-25:Vận chuyển ở nhiệt độ phòng. Bảo quản ở -20±5oC trong thời gian dài.
Tránh lặp đi lặp lại các chu kỳ đóng băng-tan băng. Thời hạn hiệu lực dự kiến là 12 tháng.
Xem nhãn để biết ngày sản xuất và sử dụng.
Sau lần mở đầu tiên, thuốc thử có thể được bảo quản ở -20±5 ° C không quá 1 tháng hoặc cho đến khi kết thúc thời gian sử dụng thuốc thử, tùy theo ngày nào đến trước, để tránh các chu kỳ đông lạnh lặp lại và số lượng thuốc thử đông lạnh -chu kỳ tan băng không được vượt quá 6 lần.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. Loại mẫu áp dụng: Dung dịch axit nucleic chiết xuất.
2. Bảo quản và vận chuyển mẫu: Bảo quản ở nhiệt độ -20±5oC trong 6 tháng. Làm đông lạnh và rã đông mẫu không quá 6 lần.
【Tước tínhing metcái thùng】
1.Nucleic acid extraction
Chọn bộ chiết axit nucleic phù hợp để chiết axit nucleic của virus và làm theo hướng dẫn của bộ dụng cụ tương ứng. Nên sử dụng bộ chiết và tinh chế axit Nucleic do Công ty TNHH Yixin Bio-Tech (Quảng Châu) sản xuất hoặc bộ dụng cụ tinh chế axit nucleic tương đương.
2. Rmỗi cáition cơn thịnh nộnt preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Loại bỏ Hỗn hợp SARS-Cov-2 và Hỗn hợp Enzyme, làm tan chảy hoàn toàn ở nhiệt độ phòng, trộn kỹ bằng thiết bị Vortex rồi ly tâm nhanh.
(2) Hỗn hợp Enzyme 16,5uL được thêm vào Hỗn hợp 358,5uL SARS-Cov-2 và trộn kỹ để thu được dung dịch phản ứng hỗn hợp.
(3) Chuẩn bị ống bát phân PCR 0,2 mL sạch và đánh dấu nó bằng 15uL dung dịch phản ứng hỗn hợp trên trên mỗi giếng.
(4) Thêm 15 µL dung dịch axit nucleic tinh khiết, đối chứng dương và đối chứng âm, rồi đậy cẩn thận nắp ống bát phân.
(5) Trộn đều bằng cách đảo ngược và ly tâm nhanh để cô đặc chất lỏng ở đáy ống.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
( 1) Thêm dung dịch đệm 375ul 2x vào Hỗn hợp SARS-Cov-2((Đông khô) để chuẩn bị hỗn hợp phản ứng. Trộn kỹ bằng pipet rồi ly tâm nhanh. （Sau khi chuẩn bị hỗn hợp phản ứng, nên bảo quản ở -20oC ở lưu trữ lâu dài.)
(2) Chuẩn bị ống bát phân PCR 0,2 mL sạch và đánh dấu nó bằng 15μL hỗn hợp phản ứng trên mỗi giếng.
(3) Thêm 15μL dung dịch axit nucleic tinh khiết, đối chứng dương và đối chứng âm, rồi đậy cẩn thận nắp ống bát phân.
(4) Trộn đều bằng cách đảo ngược và ly tâm nhanh để cô đặc chất lỏng ở đáy ống.
3. PCR ampcuộc sốngcation （Vui lòng tham khảo hướng dẫn sử dụng thiết bị để biết cài đặt vận hành.)
3. 1 Đặt ống PCR 8 vào buồng mẫu của thiết bị PCR huỳnh quang và đặt mẫu cần kiểm tra, đối chứng dương và đối chứng âm theo thứ tự nạp.
3.2 Kênh phát hiện huỳnh quang:
( 1) Gen ORF1ab chọn lọc kênh phát hiện FAM (Reporter: FAM, Quencher: None).
(2) Gen N chọn kênh phát hiện của VIC (Reporter: VIC, Quencher: None).
(3) Gen nội chuẩn chọn kênh phát hiện CY5 (Reporter: CY5, Quencher: None).
(4) Tham chiếu thụ động được đặt thành ROX.
3.3 Cài đặt thông số chương trình PCR:
| Bước chân | Nhiệt độ(°C) | Thời gian | Số chu kỳ | |
| 1 | Phản ứng sao chép ngược | 50 | 15 phút | 1 |
| 2 | Kích hoạt enzyme Taq | 95 | 2,5 phút | 1 |
| 3 | Kích hoạt enzyme Taq | 93 | 10 giây | 43 |
| Gia hạn ủ và thu nhận huỳnh quang | 55 | 30 giây | ||
Sau khi cài đặt, lưu tệp và chạy chương trình phản ứng..
4.Results analysis
Sau khi chương trình kết thúc, kết quả sẽ tự động được lưu và đường cong khuếch đại được phân tích. Đường cong khuếch đại được đặt thành ngưỡng mặc định của thiết bị.
【Explanation of test resunó 】
1. Xác định tính hợp lệ của thử nghiệm: Kênh FAM, VIC đối chứng dương phải có đường cong khuếch đại điển hình và giá trị Ct thường nhỏ hơn 34, nhưng có thể dao động do cài đặt ngưỡng khác nhau của các thiết bị khác nhau. Kênh FAM, VIC điều khiển âm phải là Ct không khuếch đại. Đồng ý rằng các yêu cầu trên phải được đáp ứng đồng thời, nếu không bài kiểm tra này không hợp lệ.
2. Nhận định kết quả
| Kênh FAM/VIC | Kết quả phán quyết |
| CT＜37 | Xét nghiệm mẫu là dương tính |
| 37<Ct＜40 | Đường cong khuếch đại có hình chữ S, các mẫu nghi ngờ cần được kiểm tra lại; nếu kết quả xét nghiệm lại trùng khớp thì đánh giá là dương tính, ngược lại là âm tính |
| Ct ≥40 hoặc không khuếch đại | Xét nghiệm mẫu âm tính (hoặc dưới giới hạn phát hiện dưới của bộ kit) |
Lưu ý: ( 1) Nếu cả kênh FAM và kênh VIC đều dương tính cùng lúc thì SARS-Cov-2 được xác định là dương tính.
(2) Nếu kênh FAM hoặc kênh VIC dương và kênh kia âm thì nên lặp lại thử nghiệm. Nếu đồng thời dương tính sẽ được đánh giá là dương tính với SARS-Cov-2, nếu không sẽ được đánh giá là âm tính với SARS-Cov-2.
Sản phẩm liên quan
-
Bộ phát hiện kháng thể IgM/IgG COVID-19
Bộ phát hiện kháng thể IgM/IgG COVID-19 （Phương pháp sắc ký miễn dịch vàng keo) Hướng dẫn sử dụng sản phẩm [TÊN SẢN PHẨM] Bộ phát hiện kháng thể IgM/IgG COVID-19 （Phương pháp sắc ký miễn dịch vàng keo) 【 THÔNG SỐ KỸ THUẬT BAO BÌ 】 1 Xét nghiệm/Bộ, 10 Xét nghiệm/Bộ 【 TÓM TẮT: Các loại virus Corona mới thuộc chi β. Covid-19 là bệnh truyền nhiễm cấp tính về đường hô hấp. Mọi người thường dễ bị tổn thương. Hiện tại, những bệnh nhân bị nhiễm virus Corona mới là nguồn lây nhiễm chính...
-
Bộ chiết xuất hoặc tinh chế axit nucleic
Bộ tách chiết hoặc tinh chế axit nucleic hoặc bảo quản ở -20oC. Mẫu phải được vận chuyển bằng cách uốn ở nhiệt độ 0oC. Giới thiệu Bộ tách chiết hoặc tinh chế axit nucleic (Phương pháp hạt từ tính) được thiết kế để tinh chế tự động RNA và DNA từ dịch cơ thể (như gạc, huyết tương, huyết thanh) bằng cách sử dụng các dụng cụ chiết axit nucleic tự động. Công nghệ hạt từ cung cấp DNA/RNA chất lượng cao phù hợp cho ...
-
Bộ xét nghiệm kháng nguyên SARS-CoV-2 （Bộ xét nghiệm sắc tố miễn dịch...
Bộ xét nghiệm kháng nguyên SARS-CoV-2 （Phương pháp sắc ký miễn dịch) Hướng dẫn sử dụng sản phẩm [TÊN SẢN PHẨM] Bộ xét nghiệm kháng nguyên SARS-CoV-2 （Phương pháp sắc ký miễn dịch) 【 THÔNG SỐ KỸ THUẬT BAO BÌ 】 1 Xét nghiệm/Bộ dụng cụ 【TÓM TẮT】 Các loại vi-rút Corona mới thuộc chi β. Covid-19 là bệnh truyền nhiễm cấp tính về đường hô hấp. Mọi người thường dễ bị tổn thương. Hiện nay, những bệnh nhân bị nhiễm virus Corona mới là nguyên nhân chính...
-
Bộ xét nghiệm kháng nguyên SARS-CoV-2
Bộ xét nghiệm kháng nguyên SARS-CoV-2 （Phương pháp sắc ký miễn dịch) Hướng dẫn sử dụng sản phẩm [TÊN SẢN PHẨM] Bộ xét nghiệm kháng nguyên SARS-CoV-2 （Phương pháp sắc ký miễn dịch) 【 THÔNG SỐ KỸ THUẬT BAO BÌ] 1 Xét nghiệm/Bộ, 25 Xét nghiệm/Bộ, 100 Xét nghiệm/Bộ 【TÓM TẮT】 The các virus Corona mới thuộc chi β. Covid-19 là bệnh truyền nhiễm cấp tính về đường hô hấp. Mọi người thường dễ bị tổn thương. Hiện tại, những bệnh nhân bị nhiễm virus Corona mới là nguồn lây nhiễm chính; người nhiễm bệnh không có triệu chứng...